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西安百萤生物科技有限公司 主营:百萤生物围绕荧光发光、荧光标记、荧光探针等技术进行产品研发,公司产品广泛用于核酸蛋白定量、细胞凋亡研究、细胞信号通路研究、细胞及线粒体膜电位检测、细胞器染色、活体示踪、抗体标记等科研领域。
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钙离子荧光探针Fluo4的使用分析

 
 
DiBAC4(3)是一种细胞膜电位敏感的亲脂性阴离子荧光染料,DIBAC4(3)本身无荧光,当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光,DIBAC4(3)进入细胞,细胞内荧光强度增加,即膜电位增加表示细胞去极化;反之,细胞内荧光强度降低即膜电位降低表示细胞超极化。DiBAC4(3)是目前*常用的线粒体膜钙离子荧光探针Fluo4

A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,使约为50%-80%满。

B. 刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5ml固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

C. 去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。

D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分钟。也宜用摇床,或手动晃动数次。

E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟。

F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,尽量避免气泡。使细胞接触封片液,切勿弄反。

G. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长在350nm左右,发射波长在460nm左右。



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